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产品描述
EZ Trans siRNA 转染试剂，是一种基于阳离子高分子聚合物开发的新型转染试剂，适用于siRNA及microRNA (miRNA)的转染。本产品经过配方升级，能在多数常见细胞中实现高效转染、低细胞毒性，且具有操作简便，稳定性好，兼容性强等优点，转染前后不用考虑血清和双抗影响，大部分细胞转染后不需要换液。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
EZ Trans siRNA转染试剂 | AC04L051 | 300 uL |
EZ Trans siRNA转染试剂 | AC04L052 | 1 mL |
产品组分
组分 | AC04L051 | AC04L052 |
A. siRNA转染试剂 | 300 uL | 1 mL |
B. 增强剂Booster | 1 mL | 3×1 mL |
运输与保存
蓝冰运输。4℃保存，有效期12个月，长期不使用建议放置于 -20℃。注：避免反复冻融。
使用方法（以 24 孔板为例，其他培养皿中转染请参考表 1）
1． 接种细胞
对于贴壁细胞：转染前一天，将细胞按照每孔 1-2×105个细胞的量进行铺板，使其在转染时密度为60%-80%为佳。
2． 准备EZ Trans - siRNA复合物：
(1) 对于每孔细胞，取1μL siRNA溶液（20μM）与5μL Booster 溶液充分吹打，吹打混匀后，吸取2μL EZ Trans siRNA 转染试剂与上述混合液混和吹打均匀，室温孵育5min。注：本转染试剂需恢复至室温，涡旋、瞬离后使用。
(2) 往上述混合物中加入12μL无菌PBS或Opti-MEM或细胞完全培养液，形成20μL EZ Trans-siRNA复合物。
3． 细胞转染：
(1) 把20μL上述 EZ Trans-siRNA复合物入到24 孔板的一个孔中，摇动混匀培养板中的液体。
(2) 在 37℃，5% CO2 培养箱培养 24-48 h，之后即可检测基因干扰效果或者后续功能实验。
转染步骤
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本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
A：能不加尽量不加，理论上抗生素进不到细胞内，但是在转染试剂的作用下，细胞的通透性增加，抗生素可能进到细胞内，对实验结果完成影响。
Q：protocol提到，要用Opti-MEM稀释质粒和转染试剂。不能用1640稀释么？另外质粒和转染试剂为什么要先稀释然后再混合？不能把转染试剂直接加到质粒溶液中混合，然后再加培养基稀释么？
Q：protocol提到，“24-48小时内检测转染效率”指的是去除含复合物的培养液换成含血清的培养基之后的24-48h，还是指加入复合物后转染24-48h？
A：所有时间都是从EZ Trans-DNA复合物与细胞接触开始算。
Q：转染效率低：制备DNA-转染试剂复合物时存在干扰或抑制因素
A：由于血清和抗生素会干扰DNA-转染试剂复合物的形成，在制备时，请使用无抗生素、无血清培养基或Opti-MEM培养基
A：在DNA转染和DNA-siRNA共转染过程中，细胞密度控制在60%-70%之间；在siRNA转染过程中，细胞密度控制在50%左右。
A：建议每次转染时，设定一个阳性对照，如绿色荧光蛋白(GFP）。
A：EZ Trans细胞转染试剂应保存在4℃。转染复合物的最佳放置试剂和温度是室温条件下10-20分钟，长时间放置会显著地降低转染效率，请务必控制放置时间在20分钟之内。
A：在形成转染复合物时，标准操作步骤推荐数秒内涡旋混合转染试剂和DNA或siRNA以生产高效转染复合物。如果想将粘附于管壁的复合物离心，请务必使用极低转速离心，如80g离心5秒。
A：EZ Trans细胞转染试剂的转染效率不受培养液中的血清影响，因此建议转染过程中细胞的培养液使用含有10%胎牛血清和抗生素的完全培养液以改善细胞的状态。
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