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产品描述
EZ Trans siRNA 转染试剂,是一种基于阳离子高分子聚合物开发的新型转染试剂,适用于siRNA及microRNA (miRNA)的转染。本产品经过配方升级,能在多数常见细胞中实现高效转染、低细胞毒性,且具有操作简便,稳定性好,兼容性强等优点,转染前后不用考虑血清和双抗影响,大部分细胞转染后不需要换液。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
EZ Trans siRNA转染试剂 | AC04L051 | 300 uL |
EZ Trans siRNA转染试剂 | AC04L052 | 1 mL |
产品组分
组分 | AC04L051 | AC04L052 |
A. siRNA转染试剂 | 300 uL | 1 mL |
B. 增强剂Booster | 1 mL | 3×1 mL |
运输与保存
蓝冰运输。4℃保存,有效期12个月,长期不使用建议放置于 -20℃。注:避免反复冻融。
使用方法(以 24 孔板为例,其他培养皿中转染请参考表 1)
1. 接种细胞
对于贴壁细胞:转染前一天,将细胞按照每孔 1-2×105个细胞的量进行铺板,使其在转染时密度为60%-80%为佳。
2. 准备EZ Trans - siRNA复合物:
(1) 对于每孔细胞,取1μL siRNA溶液(20μM)与5μL Booster 溶液充分吹打,吹打混匀后,吸取2μL EZ Trans siRNA 转染试剂与上述混合液混和吹打均匀,室温孵育5min。注:本转染试剂需恢复至室温,涡旋、瞬离后使用。
(2) 往上述混合物中加入12μL无菌PBS或Opti-MEM或细胞完全培养液,形成20μL EZ Trans-siRNA复合物。
3. 细胞转染:
(1) 把20μL上述 EZ Trans-siRNA复合物入到24 孔板的一个孔中,摇动混匀培养板中的液体。
(2) 在 37℃,5% CO2 培养箱培养 24-48 h,之后即可检测基因干扰效果或者后续功能实验。
转染步骤
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 特别注意,请务必按照图中加样顺序配制转染复合物,切勿将siRNA 溶液先与稀释液或EZ Trans siRNA转染试剂混合。
3. 本转染试剂需恢复至室温,涡旋、瞬离后使用。
4. 建议配制转染复合物最小体积为30 μL,以免吸取转染试剂量过少,影响复合效果与转染效率。
5. 加入配制完的转染复合物后,无需换液,24h 后可进行mRNA 检测。如需进行更长时间培养,可在加入siRNA 转染复合液24h 后,更换为新鲜培养液,以保证细胞生长所需营养成分。(可选:如在加完转染复合物12h 观察到有细胞生长缓慢,可在转染后12h 进行换液。)
6. 抑制效率与目的基因和siRNA工作环境相关性很大,可根据实验需要增加或减少siRNA的用量,获得最佳抑制效率。EZ Trans siRNA转染试剂经过优化,对细胞基本无毒,比例放大2-3倍用量,一般不会对细胞产生明显毒性。
表 1:不同培养皿对应的待转siRNA、 EZ Trans试剂、稀释液用量
培养器皿(每孔) | 培养液体积(mL) | siRNA(20 μM)(μL) | 增强剂Booster (μL) | 转染试剂 (μL) | 复合物稀释液 (μL) | |
96 孔板 | 0.1 | 0.2 | 1 | 0.4 | 2.4 | |
24 孔板 | 0.5 | 1 | 5 | 2 | 12 | |
12 孔板 | 1 | 2 | 10 | 4 | 24 | |
6 孔板 | 2 | 4 | 20 | 8 | 48 | |
60 mm 培养皿 | 4 | 8 | 40 | 16 | 96 | |
100 mm 培养皿 | 10 | 20 | 100 | 40 | 240 |
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本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
A:能不加尽量不加,理论上抗生素进不到细胞内,但是在转染试剂的作用下,细胞的通透性增加,抗生素可能进到细胞内,对实验结果完成影响。
Q:protocol提到,要用Opti-MEM稀释质粒和转染试剂。不能用1640稀释么?另外质粒和转染试剂为什么要先稀释然后再混合?不能把转染试剂直接加到质粒溶液中混合,然后再加培养基稀释么?
Q:protocol提到,“24-48小时内检测转染效率”指的是去除含复合物的培养液换成含血清的培养基之后的24-48h,还是指加入复合物后转染24-48h?
A:所有时间都是从EZ Trans-DNA复合物与细胞接触开始算。
Q:转染效率低:制备DNA-转染试剂复合物时存在干扰或抑制因素
A:由于血清和抗生素会干扰DNA-转染试剂复合物的形成,在制备时,请使用无抗生素、无血清培养基或Opti-MEM培养基
A:在DNA转染和DNA-siRNA共转染过程中,细胞密度控制在60%-70%之间;在siRNA转染过程中,细胞密度控制在50%左右。
A:建议每次转染时,设定一个阳性对照,如绿色荧光蛋白(GFP)。
A:EZ Trans细胞转染试剂应保存在4℃。转染复合物的最佳放置试剂和温度是室温条件下10-20分钟,长时间放置会显著地降低转染效率,请务必控制放置时间在20分钟之内。
A:在形成转染复合物时,标准操作步骤推荐数秒内涡旋混合转染试剂和DNA或siRNA以生产高效转染复合物。如果想将粘附于管壁的复合物离心,请务必使用极低转速离心,如80g离心5秒。
A:EZ Trans细胞转染试剂的转染效率不受培养液中的血清影响,因此建议转染过程中细胞的培养液使用含有10%胎牛血清和抗生素的完全培养液以改善细胞的状态。
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