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原文链接：和元生物——质粒构建
和元生物科研服务平台可为基因功能研究者提供前沿、全面、严谨的载体设计和载体构建服务，内容涵盖普通真核表达载体、病毒载体等。
病毒载体构建服务包含慢病毒、腺相关病毒、腺病毒和逆转录病毒载体等，构建内容包括基因过表达载体构建、基因定点突变表达载体构建、用于基因沉默的shRNA设计与构建、microRNA表达与封闭载体设计与构建、萤光素酶报告基因载体构建（UTR、启动子及其它功能序列）以及Cre-LoxP系统和CRISPR/Cas9基因编辑工具载体设计与构建等，力求一站式解决基因功能研究中的基因上调和基因下调需求。
质粒优势：
①表达时间快，导入细胞后约24小时可观察到目的基因表达；
②构建技术简单，成本低。
③和元的过表达载体库丰富，并且过表达的标记丰富
荧光标记：GFP、mCherry、CFP、BFP、EYFP、mNeonGreen、tdTomato、 mScarlet…
标签标记: FLAG、 HA 、Myc、His tag…
抗性标记：Puro、Neo、Hygro、BSD…
局限性：
①转染试剂具有细胞毒性，使用后影响细胞状态；
②大部分细胞较难转染，达不到基因操作目的；
③质粒不整合到细胞基因组，只能进行短时间的瞬时表达，无法进行观察周期较长的实验。
由于单纯质粒存在一定的局限性，根据实验需要需包成病毒进一步满足不同实验的需求。
不同表达载体的区别
表达系统 | 真核表达载体 | 慢病毒载体 | 重组腺相关病毒载体 | 重组腺病毒载体 |
载体基因特性 | 双链DNA质粒 | RNA逆转录病毒 | 单链DNA病毒 | 双链DNA病毒 |
外源基因表达时间 | 24h开始表达，持续3-7天 | 2-4天开始表达，长时间稳定表达 | 7-14天开始表达 | 1-2天开始表达 |
插入片段大小 | 8kb左右 | 4kb左右 | 2.8kb左右 | 6kb左右 |
稳定细胞株筛选 | 难操作 | 可以 | 不可以 | 不可以，瞬时表达 |
细胞实验 | 细胞系，部分转染效率低 | 首选，广谱，感染效率高 | 不适合 | 广谱，感染效率高 |
动物实验 | 不适合 | 适合，根据观察时间和注射部位 | 首选，根据观察时间和注射部位 | 免疫原性高，慎选 |
滴度范围 | 无 | 108~109TU/ml | 1012-1013vg/ml | 1010-1011pfu/ml |
