“和元李记”由和元生物 (股票代码：688238) 和李记生物合资成立的，主营“李记生物”“Life-ilab”试剂品牌
EZ Trans Lipo细胞转染试剂（脂质体）（以下简称“EZ Trans Lipo”）为李记生物最新研发的细胞转染试剂，EZ Trans Lipo以纳米脂质体包裹核酸通过特殊递送机制，把外源DNA、RNA、siRNA转入各类细胞，能转染贴壁细胞、悬浮细胞，还可用于siRNA和shRNA的基因敲除实验及基因表达研究。
经过对近百种细胞对比测试，EZ Trans Lipo在绝大部分受检细胞的转染效率、细胞毒性表现均与进口型产品一致或更优；具备转染效率高、细胞毒性低、适用细胞广、性价比高等优点。
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产品名称 |
规格 |
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EZ Trans Lipo细胞转染试剂（脂质体） |
1 mL |
蓝冰运输。4℃保存，有效期12个月。
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转染方法 |
原理 |
主要应用 |
特点 |
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阳离子聚合物 |
带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的 复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。 |
稳定转染 瞬时转染 所有细胞 |
除了具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点，是新一代的转染试剂。 |
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阳离子脂质体法 （EZ Trans lipo pro） |
带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物，然后脂质体上剩余的电核与细胞膜上的唾液酸残基的负电核结合；另外细胞也可以过内吞作用而将包裹了DNA的纳米脂质体颗粒吞进细胞。 |
稳定转染 瞬时转染 所有细胞 |
使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA、RNA或siRNA，能转染各种类型的细胞，没有免疫原性。在体外基因转染中有很高的效率。 |
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DEAE-葡聚糖法 |
带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 |
瞬时转染 |
相对简便、重复比磷酸钙好,但对细胞有一定的毒副 作用,转染时需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS 细胞系 |
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磷酸钙法 |
磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞 |
稳定转染 染瞬转染 |
不适用于原代细胞（所需的DNA浓度较高）,操作简便但重复性差,有些细胞不适用细胞建议用CSCL梯度离心，转染是拷贝数较多 |
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逆转录病毒(RNA) |
通过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞表面的受体相互作用而进入宿主细胞，之后反转入酶启动合成DNA并随机整合到宿主基因组中 |
稳定转染 特定宿主细胞 |
可用于难转染的细胞、原代细胞，体内细胞等,但携带基因不能太大（<8kb）, 细胞需处分裂期,需考虑安 全因素 |
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腺病毒 (双链 DNA) |
先和细胞表面的受体结合，继 而在αv整合素介导下被细胞内吞 |
瞬时转染 特定宿主细胞 |
可用于难转染的细胞,需考虑安全因素 |
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Biolistic颗粒传递法 （基因枪粒子轰击法） |
将DNA用显微重金属颗粒沉 淀，再将包被好的颗粒用弹道装置投射入细胞，DNA在胞内逐步释放，表达 |
瞬时性转染 稳定转染 |
可用于：人的表皮细胞， 纤维原细胞，淋巴细胞系以及原代细胞 |
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显微注射法 |
用显微操作将 DNA直接注入靶 细胞核 |
稳定转染 瞬时转染 |
转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞 |
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电穿孔法 |
高脉冲电压破坏细胞膜电位，DNA通过膜上形成的小孔导入 |
稳定转染 瞬时转染 所有细胞 |
适用性广，除了质粒外，还可转染大的基因组 （>65kb）但细胞致死率高， DNA和细胞用量大， 需根据不同细胞类型优化电穿孔实验条件，拷贝数较少1-20 |
本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
Q：我们传的细胞有抗生素，抗生素是绝对会影响转染效率吗？
A：能不加尽量不加，理论上抗生素进不到细胞内，但是在转染试剂的作用下，细胞的通透性增加，抗生素可能进到细胞内，对实验结果完成影响。
Q：protocol提到，要用Opti-MEM稀释质粒和转染试剂。不能用1640稀释么？另外质粒和转染试剂为什么要先稀释然后再混合？不能把转染试剂直接加到质粒溶液中混合，然后再加培养基稀释么？
A：EZ Trans细胞转染液属于阳离子类型的转染试剂，它与DNA形成复合物需要一定的条件，在合适的浓度下，有利于阳离子包裹DNA形成良好形态的复合物进入细胞。如果直接把两者直接混合，两者容易很快形成聚合物，聚集相态多样，有可能使DNA暴露在表面，不容易进入细胞，进而降低转染效率。所以EZ Trans和DNA的混合顺序也很重要。 培养细胞大多会用到胎牛血清，血清成分复杂，没有人能说清成分及含量。细胞转染液成分比较明确，但是不能确定是会不会与胎牛血清的不知名成分结合，事实上这种现象在大多数转染试剂中都会造成不良影响，所以在形成EZ Trans-DNA复合物过程中要避免血清的影响。
Q：protocol提到，“24-48小时内检测转染效率”指的是去除含复合物的培养液换成含血清的培养基之后的24-48h，还是指加入复合物后转染24-48h？
A：所有时间都是从EZ Trans-DNA复合物与细胞接触开始算。
Q：转染效率低-没有生成高效率的DNA-转染试剂复合物
A：在制备生成DNA-转染试剂复合物时，请不要使用含有血清的产品。在大多数情况下，使用不含血清的DMEM培养液能获得高效率的DNA-转染试剂复合物。我们建议使用含血清介质转染，单主人南复合物必须在无血清中形成。注意：最好也能避免Opti-MEN培养液，即使其血清含量较低。
Q：转染效率低-生成DNA-转染试剂复合物过程中存在抑制复合物形成的抑制剂
A：不含血清的培养液是高效DNA-转染试剂复合物形成的关键。在生成复合物过程中，避免使用一下化学物质：高浓度的磷酸盐、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸葡聚糖或其他硫酸化的蛋白聚糖等。
Q：转染效率低-转染试剂复合物中含有血清
A：在制备生成DNA-抓让试剂复合物时，请使用无血清培养基或者Opti-MEM培养。在大多数情况下，使用不含血清的DMEM培养基能获得提高效率的DNA-转染试剂复合物。
Q：转染效率低、细胞毒性大-细胞密度未优化
A：在DNA转染和DNA-siRNA共转染过程中，细胞密度控制在60%-70%之间；在siRNA转染过程中，细胞密度控制在50%左右。
Q：怎么确定确定实验的转染效率？
A：建议每次转染时，设定一个阳性对照，如绿色荧光蛋白(GFP）。
Q：转染效率低-将转染复合物长时间放置于室温
A：EZ Trans细胞转染试剂应保存在4℃。转染复合物的最佳放置试剂和温度是室温条件下10-20分钟，长时间放置会显著地降低转染效率，请务必控制放置时间在20分钟之内。
Q：转染效率低-高转速离心转染复合物
A：在形成转染复合物时，标准操作步骤推荐数秒内涡旋混合转染试剂和DNA或siRNA以生产高效转染复合物。如果想将粘附于管壁的复合物离心，请务必使用极低转速离心，如80g离心5秒。
Q：细胞毒性大-DNA用量太大
A：建议绘制量效关系曲线来确定最佳的DNA用量。
Q：细胞毒性大-转染试剂用量太大
A：建议绘制量效关系曲线来确定最佳的转染试剂用量。
Q：细胞毒性大-转染时细胞状态较差
A：EZ Trans细胞转染试剂的转染效率不受培养液中的血清影响，因此建议转染过程中细胞的培养液使用含有10%胎牛血清和抗生素的完全培养液以改善细胞的状态。
Q：细胞毒性大-稳定转染时抗生素加入太早
A：请在转染48h后加入选择用抗生素。
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